上海研域生物人ELISA檢測(cè)試劑盒的操作步驟與方法

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人ELISA檢測(cè)試劑盒的操作方法：

本方法首先將特異性抗體吸附于固相載體表面，我們把抗原和抗體吸附到固相載體表面的這個(gè)過(guò)程，稱(chēng)為包被，也可叫做致敏。經(jīng)洗滌后分成兩組：一組加酶標(biāo)記抗原和被測(cè)抗原的混合液，而另一組只加酶標(biāo)記抗原，再經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色，這兩組底物降解量之差，即為我們所要測(cè)定的未知抗原的量。

1. 包被抗體：用包被緩沖液稀釋特異性抗體球蛋白至*適濃度（1～10μg/ml），每凹孔加0.3ml，4℃過(guò)夜，或37℃水浴3小時(shí)，貯存冰箱。

2. 洗滌：移去包被液，凹孔用洗滌緩沖液（含0.05%吐溫-20）洗3次，每次5分鐘。

3. 分2組，a組加酶標(biāo)記抗原和被檢抗原Elisa試劑盒混合液0.2ml，b組只加酶標(biāo)記抗原液0.2ml，37℃作用1～2小時(shí)。（混合液可作成不同稀釋度）

4. 洗滌：移去包被液，凹孔用洗滌緩沖液（含0.05%吐溫-20）洗3次，每次5分鐘。

5. 加入0.2 ml底物溶液于每個(gè)凹孔（OPD或OT），室溫作用30分鐘（另作一空白對(duì)照，0.4ml底物加0.1ml終止劑）。

6. 加終止劑：每凹孔加2M H2SO4或2M檸檬酸0.05ml。

7. 用酶標(biāo)比色計(jì)測(cè)定a、b兩組OD值，并求出a、b、OD值的差數(shù)。

人ELISA檢測(cè)試劑盒的注意事項(xiàng)：

1. 干冰是固體二氧化碳，溫度為零下78℃，濕冰就是冰的溫度，一般為冷凍條件的溫度，如在零下20℃冷凍的冰的溫度為零下20℃。對(duì)于一些酶類(lèi)等蛋白產(chǎn)品，需要干冰運(yùn)輸，其他大多數(shù)生化試劑采用濕冰即可；

2. 運(yùn)輸常溫試劑的時(shí)候，不需要冰。對(duì)于需要冷藏的試劑，在用冰運(yùn)輸?shù)臅r(shí)候，要把試劑同冰之間有隔離物，不能直接接觸試劑包裝，如試劑外面加裝盒子，在盒子外面加冰，基本都采用冰塊，不能直接用水結(jié)成的冰，因?yàn)楸诨髸?huì)形成水，容易污染試劑。加冰塊的量沒(méi)有嚴(yán)格限制，以試劑Elisa試劑盒四周都處于冰塊包圍為宜；

3. 不要小看生物試劑的量，很多抗體類(lèi)試劑、酶類(lèi)試劑是很貴的，可以達(dá)到上千元/mg(即每公斤幾百，上千萬(wàn)元），其保存條件也是很?chē)?yán)格的，否則容易失去活性。運(yùn)輸?shù)臅r(shí)候建議使用冰塊，而非碎冰，

主要原因：
（1）碎冰的溫度高，而冰塊的溫度更低；

（2）冰塊可以更長(zhǎng)時(shí)間的保持低溫；

（3）碎冰容易化成水。

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